Hall i Holy Rood Palace. Han säger att staden har upplopp. Någon som inte känner till honom i spetsen - mumrar, maskerade, dansare med klockor, människor i svarta huvor - hotade, förutspådde och uppmanade folket att inte lyda drottningen. Kungören till drottning Riccio bekräftar att han också ibland tittar på när människor ivrigt lyssnar på dessa predikaner. Sidan berättar vidare att folket sprängde in i drottningens kapell och skrek: "Papisternas bo!", Att buffeln till Darnley, drottningens man, hoppade upp till altaret och började låtsas vara en predikan, och folket svarade honom med hånliga kopplingar. Drottning Mary Stuart i förtvivlan. Hon känner folks hat, de flesta hovmän har lämnat henne; hon undrar hur hennes kristendom kan vara så annorlunda än kristendomen hos befolkningen i Skottland. Riccio föreslår omedelbart förbereda ett dekret som straffar de ansvariga för upploppen. Maria dikterar sin sida, sidan klargör om man vill ange namnet på Heinrich Darnley, drottningens man. Mary tvekar; hon misstänker att upploppen var inspirerade av honom - folkmassan leddes trots allt av kungens buffé. Här påminner Riccio henne om att hon är drottningen; hon är som solen, och hon har rätt att straffa från Gud. Han kräver att omedelbart ringa tjänstemannen för att meddela drottningens dekret. Douglas kommer in. Maria ber honom att ta papperet till Kungliga kanslern Morton, så att han skulle stämpla. Douglas skannar dekretet och ser att det inte har kungens namn. Han frågar drottningen om detta. Riccio ansvarar för henne. Douglas tappar humöret. Han uppmanar drottningen att inte använda blodiga undertryckningsåtgärder och antyder att han ser detta som franska eller italienska inflytande. Men drottningen påminner kallt honom om sin makt att eliminera de ämnen som är olydiga mot hennes vilja. En gräl uppstår mellan Riccio och Douglas, Douglas utmanar Riccio till en duell och svär att han kommer att döda venetianern i morgon. Drottningen lämnar och tar bort Riccio. Douglas lämnas ensam, han överväger en duell. Morton går in. Douglas visar honom dekretet. Morton är obeslutsam: han är rädd för både kungen och drottningens vrede. Utan att stämpla, bjuder Morton kungen. För närvarande engagerade Henry sig i en konversation med sin jester Nick, som retar honom med det faktum att drottningen har verklig makt i Skottland, och Henry är bara hennes make, att drottningen väljer nära, till exempel, den italienska harpisten Riccio ... För närvarande Morton ger ett olyckligt dekret. Kung i ilska, beslutar han att döda Riccio. Kung Lindsay kommer in på domstolen, han kallar kungen att jaga med den nyförvärvade falken. Morton svarar att kungen redan har en ockupation idag. Lindsay ansluter sig villigt mot komplottet mot Riccio. Han förbjuder bokstavligen att döda Riccio ikväll, för han måste döda honom i morgon. Sedan skickar Henry utnyttjandet av förseningen och skickar jestern till astrologen för att ta reda på vilken plats stjärnorna är för hans avsikter.
Astrologen i sitt laboratorium (han är också en alkymist) hävdar med sig själv att erfarenhet bekräftar vetenskaplöshet, det syftet, stjärnorna kommer att dominera människan, bortska från gott och ont. Nick kommer in, stänker av vittisism, astrologen är inte underlägsen för honom i vett. Nick rapporterar att kungen skickade honom för att fråga om Riccios öde och berättar astrologen att förutsäga Riccios död. Astrologen svarar att stjärnorna kommer att berätta för honom, inte människor, och förutsäger i sin tur döden av jester. Med det lämnar han. Drottningens sida orsakad av astrologen visas. Page älskar sin älskarinna. Astrologen berättar för honom att berätta för drottningen att idag kommer mannen hon älskar att dö. "Hur, Botwell kommer att dö idag?" - utropar en sida. Astrologen är förbryllad. Han tänkte på Riccio och skyndar på sidan för att varna honom om detta. Statt ensam undrar astrologen - det visade sig också från stjärnorna att Botwell på något sätt var mörkt förbundet med drottningen - genom Mars, Saturn ... Botwell kommer in. Av hans monolog blir det tydligt att han oväntat befann sig i en astrologs hus. Insåg var han kom och frågar Botwell astrologen hur mycket han har kvar att leva. Den gamle mannen svarar att tre år och att Botwell kommer att bli kung. Botwell tar ut en flaska gift som han ville självmorda, vill kasta bort den - och tveka. I atmosfären av palatsintriger kommer alla vapen verkligen vara praktiska. Han lämnar.
Sidan berättar för drottningen att Riccio kommer snart. Drottningen ser fram emot honom - enligt hennes åsikt var han ensam trogen henne. "Och Botvel?" Sidan frågar. "Vem är Botvel?" - drottningen är intresserad. En förvånad sida berättar för Mary hur, medan båtliv, en stark vind plockade en ros från drottningens huvud, en blomma föll i vattnet. Och sedan rusade en av hovmännen - Botvel - in i båten och jagade skrämmande roddaren för att fånga en ros från vattnet. Efter att ha hört berättelsen skickar Mary en sida för att be. Hon erkänner för Gud att hon inte har mer styrka att motstå sin kärlek till Botwell. Drottningen vet att hon på domstolen betraktas som kär i Riccio. Riccio går in. Mary rapporterar en dödlig fara som hotar honom och kallt säger farväl till honom och pekar honom till fartyget som tar honom till Rom. I desperation försöker Riccio be drottningen att avbryta beslutet att lämna. Drottningen är fast.
Heinrich, Morton och Lindsay fick reda på Riccios förestående avresa och medvetet fördrivna för att döda honom eller låta honom segla. Sedan visas Douglas och rapporterar att Riccio redan har seglat. Douglas i förtvivlan, han längtar efter blodig hämnd, hans riddare ära skadas. Plötsligt möter de en sida som ger drottningen en anteckning från Riccio - han lämnade inte och kommer att vara med henne på kvällen. Konspiratörerna tar bort anteckningen.
Maria är upptagen med att brodera i sitt rum. Riccio, som kom, förklarar för henne att han inte kunde lämna, för han har en duell med Douglas på morgonen. Han medger att han inte behöver livet utan hennes kärlek. Han ber Maria ge honom en krans av rosor - han planterar blommor på altaret i Rom ... Henry, Douglas och Dindsay kommer in och dödar Riccio. Drottning försvinner. Douglas slås av skam och skräck - han går frivilligt tillbaka i exil. Henry är orolig om drottningen kommer att hata honom. Lindsay tar kungen bort och viskar till honom om den kommande jakten. Queen Botwell är inbjuden av Queen. Mary kommer till sitt sinne, ser Botvel och erkänner sin kärlek till honom. Botvallen tvingar henne att erkänna att hon vill ha Henrys död och ger henne sin flaska gift och säger att det här är en sömnpiller. Mary ger kungen detta "medicin", men giftet dricker buffén. Ingenting kan dock stoppa den mordiska intrigerna - Botwell spränger kung Henrys hus. På avstånd hörs folkets växande rop. Botten med drottningen gömmer sig.